（徐州市畜禽水產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心等）
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摘要：摘要：對乳與乳制品中非蛋白氮含量的測定方法進(jìn)行了調(diào)整改進(jìn)，使用了全自動定氮儀，將蛋白沉淀后濾紙過濾改為離心取上清液，去掉了消解液轉(zhuǎn)移定容再取用的實驗步驟，將鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃調(diào)整為0.02 mol/L，每個樣品減少25ml三氯乙酸溶液的用量，15ml濃硫酸的用量。改進(jìn)后各濃度添加回收試驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于3%，回收率在99.89%-102.32%。

關(guān)鍵詞：非蛋白氮；改進(jìn)

1 引言

乳與乳制品中的非蛋白氮（MPN），是指乳與乳制品中非蛋白狀態(tài)的含氮元素的化合物。在動物飼養(yǎng)業(yè)中，非蛋白氮作為反芻動物飼料的蛋白代替物，用做補(bǔ)充反芻動物對日糧蛋白的需要^[1]。牛乳中大約含0.5%的含氮化合物，蛋白質(zhì)占含氮化合物的95%，非蛋白氮占含氮化合物的5%^[2]。正常情況下，乳品中非蛋白氮含量與蛋白質(zhì)代謝物尿素氮含量呈正相關(guān)^[3]。然而，不法商販?zhǔn)芙?jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，直接向原料乳中添加三聚氰胺等嚴(yán)令禁止添加的含氮化合物，給社會造成了重大危害。乳與乳制品中的非蛋白氮的測定方法（GB/T 21704-2008）是三聚氰胺事件后出臺的國家標(biāo)準(zhǔn)，運用了半微量凱氏定氮法，操作較為繁瑣，本文對檢測方法進(jìn)行了適當(dāng)?shù)恼{(diào)整改進(jìn)，使用了全自動定氮儀，取得了良好的試驗效果。

2 實驗部分

2.1 試劑


鹽酸為優(yōu)級純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2.2 樣品處理

將待測樣品搖勻，準(zhǔn)確稱取5 g，到0.0001 g，置于離心管中，加入15 ml 15%三氯乙酸溶液，漩渦3 min混勻，8000 r/min離心5 min，取10 g上清液置于消解管中，再加入0.1 g CuSO₄•5H₂O，2 g K₂SO₄及5 ml濃硫酸。置于消解儀中，260℃消解至泡沫停止，420℃消解1 h。取下放冷，加入10 ml去離子水，進(jìn)行定氮蒸餾。

空白試驗：取0.1 g蔗糖于離心管中，按上法進(jìn)行處理，并進(jìn)行定氮蒸餾。

2.3 定氮蒸餾

取甲基紅—溴甲酚綠乙醇溶液指示劑（甲基紅1 g/L—溴甲酚綠5 g/L）10 ml與20 g硼酸定容至1L，用0.05mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至4.2左右，配置成指示劑-硼酸吸收液。

將消解管置于定氮儀中，設(shè)置定氮儀加入20 ml 400g/L NaOH溶液，進(jìn)行蒸餾，用0.02% 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液進(jìn)行滴定。

3 結(jié)果與討論

3.1 精密度試驗、空白試驗和添加回收試驗

表1精密度試驗、空白試驗和添加回收試驗結(jié)果

吸收液用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)了pH值，因此空白對照中有較大的滴定體積，這是為了對定氮儀進(jìn)行精密度測試，并不反應(yīng)空白中實際的非蛋白氮含量，在滴定樣品的時候，需要扣除空白滴定體積。

使用硫酸銨做添加回收試驗，在添加濃度0.02%-0.1%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于3%，回收率在99.89%-102.32%。

3.2 離心處理效果試驗

表2 離心與濾紙過濾試驗結(jié)果

GB/T 21704-2008中使用濾紙過濾蛋白質(zhì)沉淀后的液體，由上表可知，蛋白質(zhì)沉淀后的液體用離心處理與用濾紙過濾處理的效果相當(dāng)。

3.3 留樣檢測結(jié)果

對某市畜禽水產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心生鮮牛乳留樣92份進(jìn)行了測定，測定結(jié)果如下：

圖1 留樣檢測結(jié)果

66個樣品的非蛋白氮含量在0.03%，20樣品的非蛋白氮含量在0.02%，非蛋白氮含量在0.02%-0.03%的樣品占樣品總數(shù)的93.5%，0.01%占3.3%，0.04%占2.2%，0.05%占1.1%。

3.4 處理方法改進(jìn)

有文獻(xiàn)報道，3倍體積的15%三氯乙酸對生鮮牛乳中蛋白質(zhì)有*的沉淀效果^[4]。用離心代替GB/T 21704-2008中濾紙過濾，增加實驗的可操作性。減少去除蛋白后的上清液取用量，，按比例減少催化劑硫酸銅和增加沸點的硫酸鉀用量。因為乳與乳制品中非蛋白氮含量均較低，因此同時減少了濃硫酸的用量。改進(jìn)后每個樣品減少了25ml三氯乙酸溶液的用量，15ml濃硫酸的用量。取消了消解液定容再取用的步驟，避免了消解液轉(zhuǎn)移定容再轉(zhuǎn)移過程中的損失和不確定度的增加。增加滴定酸溶液的濃度至0.02 mol/L，減小了滴定酸配置過程對滴定結(jié)果的影響，在乳與乳制品中非蛋白氮含量為0.03%的情況下，滴定體積約為3 ml。

4 結(jié)論

乳與乳制品中非蛋白氮測定的國標(biāo)方法經(jīng)改進(jìn)后，使用了自動定氮儀，調(diào)整了樣品處理方法，減少了實驗操作步驟，增加了實驗的可操作性，減少了試劑用量。改進(jìn)后方法操作更簡便，試劑用量更節(jié)省，并有良好的精密度和回收率，對乳與乳制品中非蛋白氮的測定有現(xiàn)實指導(dǎo)意義。